La matriz extracelular en la curación de las heridas cutáneas. Aspectos físicos, químicos y biológicos / Extracellular matrix in healing of cutaneous wounds. Physical, chemical and biological aspects

Se revisan los nuevos conocimientos sobre la matriz extracelular (MEC), que han permitido descubrir su importante rol en la cicatrización de las heridas cutáneas. Se describen sus características morfofisiológicas y cómo interviene en la curación de las heridas cutáneas. Se presentan cuatro casos clínicos en los que se aplicó este enfoque terapéutico: los sustitutos de piel y la "cura húmeda"

We review the new knowledge about the extracellular ma-trix (ECM) that has allowed us to discover its important role in the healing of cutaneous wounds. The morpho-physiological characteristics of ECM and its role in the healing of cutaneous wounds are described. Four clinical cases are presented where this therapeutic approach was applied: the skin substitutes and the "moist wound healing".

Mecanismos moleculares de la esquizofrenia / Molecular mechanisms of schizophrenia / Mecanismos moleculares da esquizofrenia

La etiología de la esquizofrenia no está totalmente dilucidada. Se conocen más de 100 diferentes loci de genes relacionados con esquizofrenia, la mayoría de los cuales codifican moléculas asociados a los sistemas de neurotransmisores o al neurodesarrollo. Las primeras abarcan receptores de los neurotransmisores como dopamina, GABA o glutamato y de otros neurotransmisores con menor relación, como la serotonina y la acetilcolina. También están implicadas diversas enzimas relacionadas con el metabolismo, cotransportadores y algunas proteínas intracelulares involucradas en la degradación o síntesis de dichos neurotransmisores. Entre las moléculas que intervienen en el neurodesarrollo están los factores neurotróficos (BDNF, DISC1, NRG1) y las proteínas del complemento C3 y C4, que median la respuesta inflamatoria y la poda sináptica durante el desarrollo temprano. Los productos de la producción genética involucrados en la etiología de la esquizofrenia aportan a la vulnerabilidad selectiva o al proceso de lesión que se instaura o progresa en el paciente, por tanto, su estudio es de relevancia para la comprensión de los fenómenos clínicos propios de la enfermedad.

The etiology of schizophrenia is not fully elucidated. More than 100 different gene loci related to schizophrenia are known, most of which encode molecules associated with neurotransmitter systems or neurodevelopment. These include receptors for neurotransmitters such as dopamine, GABA, or glutamate, as well as other neurotransmitters with less direct relevance, such as serotonin and acetylcholine. Various enzymes involved in metabolism, cotransporters, and intracellular proteins involved in the degradation or synthesis of said neurotransmitters are also implicated. Among the molecules involved in neurodevelopment are neurotrophic factors (BDNF, DISC1, NRG1) and complement proteins C3 and C4, which mediate the inflammatory response and synaptic pruning during early development. The genetic products involved in the etiology of schizophrenia contribute to selective vulnerability or the process of injury that is established or progresses in the patient. Therefore, their study is relevant to the understanding of the clinical phenomena associated with the disease.

A etiologia da esquizofrenia não está totalmente elucidada. Mais de 100 diferentes loci de genes relacionados à esquizofrenia são conhecidos, a maioria dos quais codifica moléculas associadas a sistemas de neurotransmissores ou neurodesenvolvimento. O primeiro inclui receptores para neurotransmissores como dopamina, GABA ou glutamato e outros neurotransmissores menos relacionados, como serotonina e acetilcolina. Também estão envolvidas várias enzimas relacionadas com o metabolismo, cotransportadores e algumas proteínas intracelulares envolvidas na degradação ou síntese dos referidos neurotransmissores. Entre as moléculas envolvidas no neurodesenvolvimento estão os fatores neurotróficos (BDNF, DISC1, NRG1) e as proteínas do complemento C3 e C4, que medeiam a resposta inflamatória e a poda sináptica durante o desenvolvimento inicial. Os produtos da produção genética envolvidos na etiologia da esquizofrenia contribuem para a vulnerabilidade seletiva ou para o processo de lesão que se instala ou progride no paciente, portanto, seu estudo é relevante para a compreensão dos fenômenos clínicos da esquizofrenia

Rinovirus y metapneumovirus en pacientes con infección respiratoria aguda grave / Rhinovirus and metapneumovirus in patients with severe acute respiratory infection

Introducción. Los virus son los principales agentes etiológicos en las infecciones respiratorias agudas graves; un alto porcentaje queda sin diagnóstico viral. Objetivo. Describir la frecuencia de rinovirus y metapneumovirus en pacientes pediátricos de una unidad centinela de Mar del Plata con infección respiratoria aguda grave y resultado negativo para virus clásicos por inmunofluorescencia y biología molecular. Población y métodos. Se realizó un estudio descriptivo de corte transversal. Se evaluó la presencia de rinovirus y metapneumovirus por biología molecular en 163 casos negativos para panel respiratorio por técnicas de vigilancia referencial, durante todo el año 2015. Resultados. Se detectó rinovirus en el 51,5 % de los casos, metapneumovirus en el 9,8 % y coinfección rinovirus-metapneumovirus en el 6,1 %. Fueron negativos para ambos virus el 32,5 %. Conclusiones. La selección de muestras sin diagnóstico virológico permitió identificar rinovirus y metapneumovirus como agentes causales de infecciones respiratorias agudas graves pediátricas y su impacto en la morbimortalidad infantil y en nuestro sistema sanitario.

Introduction. Viruses are the main etiologic agents involved in severe acute respiratory tract infections; a viral diagnosis is not established in a high percentage of cases. Objective. To describe the frequency of rhinovirus and metapneumovirus in pediatric patients with severe acute respiratory infection and negative results for typical viruses by immunofluorescence and molecular biology at a sentinel unit of Mar del Plata. Population and methods. This was a descriptive, cross-sectional study. The presence of rhinovirus and metapneumovirus was assessed by molecular biology in 163 cases negative for respiratory panel by referral surveillance techniques throughout 2015. Results. Rhinovirus was detected in 51.5% of cases, metapneumovirus in 9.8%, and coinfection with rhinovirus and metapneumovirus in 6.1%. Results were negative for both viruses in 32.5%. Conclusions. The selection of samples without a viral diagnosis allowed us to identify rhinovirus and metapneumovirus as causative agents of severe acute respiratory infections in children and assess their impact on child morbidity and mortality and on our health care system

Diagnóstico de la Enfermedad de Chagas congénito: Aspectos relevantes

Introducción: El presente artículo describe aspectos relevantes entorno de la Enfermedad de Chagas congénita, tales como epidemiología, sintomatología, revisión de casos clínicos y las técnicas diagnósticas. Métodos: Se realizó una revisión de la literatura por medio de bases de datos bibliográficas como PubMed, Science direct, Scopus, Plos One, SciELO, teniendo como criterio de inclusión las publicaciones artículos o comprendidos entre enero de 2013 y enero del año 2022 en idioma español e inglés. Resultados: Se determinó que la prevalencia de la Enfermedad de Chagas congénita aún es un problema de salud pública en áreas endémicas y no endémicas, siendo la serología materna indispensable para dar seguimiento oportuno a los casos. Conclusiones: Los seguimientos diagnósticos actuales difieren en los países endémicos y se están aplicando tamizajes en zonas no endémicas donde migran mujeres procedentes de áreas de trasmisión activa de la Enfermedad Chagásica.

Introduction: This article describes relevant aspects of congenital Chagas disease, such as epidemiology, symptoms, review of clinical cases, and diagnostic techniques. Methods: A review of the literature was carried out through bibliographic databases such as PubMed, Science direct, Scopus, Plos One, SciELO, having as inclusion criteria articles or publications between January 2013 and January 2022 in Spanish and English. Results: It was determined that the prevalence of congenital Chagas disease is still a public health problem in endemic and non-endemic areas, and maternal serology is essential for timely monitoring of cases. Conclusions: Current diagnostic follow-ups differ in endemic countries and screening is being applied in non-endemic areas where women from areas of active transmission of Chagasic disease migrate.

High-intensity interval training (treadmill) effects in myokines and endoplasmic reticulum stress of calf muscles in obese mice / Efectos del entrenamiento interválico de alta intensidad (trotadora) en miocinas y estrés del retículo endoplasmático de los músculos surales en ratones obesos

SUMMARY: Obesity is commonly associated with chronic tissue inflammation and skeletal muscle dysfunction. The study aimed to investigate the effects of High-Intensity Interval training (HIIT) on myokines and endoplasmic reticulum (ER) stress of diet- induced obese (DIO) mice. Three-month-old C57BL/6 male mice were fed a control (C) diet (n=20) or a high-fat (HF) diet (n=20) for 16 weeks. Then, half of the groups underwent HIIT (treadmill running) for an additional four weeks. HIIT increased calf muscles' contribution to BW (+24 %) and reduced weight gain in HF/HIIT than in HF (-120 %). Intramuscular fat accumulation was observed in HF and HF/ HIIT. Peak velocity was higher in HF/HIIT compared to HF (+26 %). Plasma insulin did not change, but glycemia was lower in HF/HIIT than in HF (-30 %). Fndc5 (+418 %) and Irisin (+72 %) were higher in HF/HIIT than in HF. Muscle Fgf21 was higher in HF/HIIT compared to HF (+30 %). In addition, NfKb (-53 %) and Tnfa (-63 %) were lower in HF/HIIT than in HF. However, Il1b (-86 %), Il6 (- 48 %), Il7 (-76 %), and Il15 (-21 %) were lower in HF/HIIT than in HF. Finally, HIIT reduced ER stress in HF/HIIT compared to HF: Atf4, -61 %; Chop, -61 %; Gadd45, -95 %. In conclusion, HIIT leads to weight loss and avoids muscle depletion. HIIT improves blood glucose, Irisin-Fndc5, and peak velocity. In addition, HIIT mitigates muscle inflammation and ER stress.

La obesidad es asociada comúnmente con inflamación tisular crónica y disfunción del músculo esquelético. El estudio tuvo como objetivo investigar los efectos del entrenamiento de intervalos de alta intensidad (HIIT) en las mioquinas y el estrés del retículo endoplásmico (ER) de ratones obesos inducidos por dieta (DIO). Se alimentó a ratones macho C57BL/6 de tres meses de edad con una dieta control (C) (n=20) o una dieta rica en grasas (HF) (n=20) durante 16 semanas. Luego, la mitad de los grupos se sometieron a HIIT (carrera en una trotadora) durante cuatro semanas más. HIIT aumentó la contribución de los músculos de la pantorrilla al BW (+24 %) y redujo el aumento de peso en HF/HIIT en HF (-120 %). Se observó acumulación de grasa intramuscular en HF y HF/HIIT. La velocidad máxima fue mayor en HF/HIIT en comparación con HF (+26 %). La insulina plasmática no cambió, pero la glucemia fue menor en HF/HIIT que en HF (-30 %). Fndc5 (+418 %) e Irisin (+72 %) fueron mayores en HF/HIIT que en HF. El Fgf21 muscular fue mayor en HF/ HIIT en comparación con HF (+30 %). Además, NfKb (-53 %) y Tnfa (-63 %) fueron menores en HF/HIIT que en HF. Sin embar- go, Il1b (-86 %), Il6 (-48 %), Il7 (-76 %) e Il15 (-21 %) fueron más bajos en HF/HIIT que en HF. Finalmente, HIIT redujo el estrés de RE en HF/HIIT en comparación con HF: Atf4, -61 %; Picar, - 61 %; Gadd45, -95 %. En conclusión, HIIT conduce a la pérdida de peso y evita el agotamiento muscular. HIIT mejora la glucosa en sangre, Irisin-Fndc5 y la velocidad máxima. Además, HIIT mitiga la inflamación muscular y el estrés ER.

Efectividad de una metodología de aprendizaje profesional basada en proyectos en la asignatura Biología Molecular / Effectiveness of a project-based professional learning methodology in the Molecular Biology subject

Fundamento: la asignatura Biología Molecular ha presentado insuficiencias en el proceso enseñanza aprendizaje en la Facultad de Ciencias Médicas de Holguín, las que requieren solución. Objetivo: valorar la efectividad de una metodología de aprendizaje profesional basada en proyectos en la asignatura Biología Molecular como forma de perfeccionar el proceso de enseñanza aprendizaje. Métodos: se realizó una investigación de desarrollo en la Facultad de Ciencias Médicas de Holguín durante el curso 2021. Se emplearon los métodos teóricos: histórico-lógico, analítico-sintético y el inductivo-deductivo; empíricos: el análisis documental y el registro de las calificaciones de las preguntas de la primera convocatoria del examen final de la asignatura. Se realizaron pruebas estadísticas a los resultados de la evaluación final. Se utilizó una metodología de aprendizaje basada en proyectos para la implementación de la Biología Molecular, aplicada a una parte del contenido del programa analítico de la asignatura, que utilizó guías didácticas para los estudiantes y orientaciones metodológicas a los profesores, con el soporte de videos complementarios a las conferencias y a contenidos de currículo oculto, relacionados con la vinculación básico-clínica con orientación profesionalizante. Resultados: las preguntas del examen final cuyo contenido fue tratado según la metodología de proyecto de aprendizaje mostraron significativamente mejores resultados que aquellas tratadas de forma convencional. Conclusiones: la metodología de aprendizaje basada en proyectos para la asignatura Biología Molecular se determinó factible para su aplicación y proporcionó la flexibilidad necesaria para el tránsito de la docencia presencial a la modalidad a distancia.

Background: the Molecular Biology subject has presented insufficiencies in the teaching-learning process Holguín Faculty of Medical Sciences, which require a solution. Objective: to assess the effectiveness of a project-based professional learning methodology in the Molecular Biology subject as a way to improve the teaching-learning process. Methods: a development investigation was carried out at the Holguín Faculty of Medical Sciences during the 2021 academic year. Theoretical methods were used: historical-logical, analytical-synthetic and inductive-deductive; Empirical ones: the documentary analysis and the record of the qualifications of the questions of the first call of the final exam of the subject. Statistical tests were performed on the results of the final evaluation. A project-based learning methodology was used for the implementation of Molecular Biology, applied to a part of the content of the analytical program of the subject, which used didactic guides for students and methodological orientations for teachers, with the support of complementary videos to the lectures and hidden curriculum contents, related to the basic-clinical link with a professional orientation. Results: the final exam questions where its content was treated according to the learning project methodology showed significantly better results than those treated conventionally. Conclusions: the project-based learning methodology for the Molecular Biology subject was determined feasible for its application and provided the necessary flexibility for the transition from face-to-face teaching to distance learning.

Análisis in silico de las alteraciones de la secuencia y estructura de RBD-SARS-CoV-2, que afectan su complementariedad por anticuerpos neutralizantes IgG-antiRBD

Las vacunas anti-SARS-CoV-2 inducen la producción de anticuerpos neutralizantes IgG contra el Dominio de Unión al Receptor de la proteína S del virus (IgG-antiRBD). En Bolivia, Sinopharm y Sputnik V fueron vacunas ampliamente utilizadas durante la pandemia. Sin embargo, las mutaciones y los cambios sufridos en SARS-CoV-2 fueron responsables de las nuevas olas de contagio. Objetivo: determinar las alteraciones a nivel de secuencia y de estructura del RBD-SARS-CoV-2, que afectan su complementariedad por anticuerpos neutralizantes IgG-antiRBD. Material y Métodos: se obtuvieron las secuencias y estructuras cristalográficas del RBDSARS-CoV-2 a partir de la base de datos Protein Data Bank. Para el Alineamiento Múltiple de Secuencias y el Alineamiento Estructural, se emplearon Mega6 y Chimera1,15. Resultados: el Alineamiento Múltiple de Secuencias y Alineamiento Estructural de las principales variantes epidemiológicas de SARS-CoV-2 evidencian que, krakenXBB1.5 fue la más divergente a nivel de secuencia, mientras que, omicronBA2.75 presentó más cambios estructurales y mayores impedimentos estéricos al interaccionar con IgG-antiRBD, siendo la más contagiosas y más evasiva a la respuesta inmunológica. Conclusiones: el uso de herramientas bioinformáticas para el seguimiento en los cambios moleculares de SARS-CoV-2 permiten predecir el comportamiento epidemiológico de nuevas variantes emergentes y además promover el mejoramiento en los criterios de prevención.

Anti-SARS-CoV-2 vaccines induce the production of IgG neutralizing antibodies against the Receptor Binding Domain of the S protein of the virus (IgG-antiRBD). In Bolivia, Sinopharm and Sputnik V were widely used vaccines during the pandemic. However, the mutations and changes suffered in SARS-CoV-2 were responsible for the new contagion outbreaks. Objective: To determine the sequence and structure alterations of RBD-SARS-CoV-2, which affect its complementarity by IgG-antiRBD neutralizing antibodies. Material and Methods: The sequences and crystallographic structures of RBD-SARS-CoV-2 were obtained from the Protein Data Bank database. For Multiple Sequence Alignment and Structural Alignment, Mega6 and Chimera1.15 were used. Results: The Multiple Sequence Alignment and Structural Alignment of the main epidemiological variants of SARS-CoV-2 showed that krakenXBB1.5 was the most divergent at the sequence level, while omicronBA2.75 presented more structural changes and greater steric hindrances when interacting with IgG-antiRBD, being the most contagious and most evasive to the immune response. Conclusions: The use of bioinformatics tools for monitoring the molecular changes of SARS-CoV-2 make it possible to predict the epidemiological behavior of new emerging variants and also promote improvement in prevention criteria

Segundo Simposio de Medicina Diagnóstica / Second Symposium on Diagnostic Medicine

De acuerdo con las estadísticas de GLOBOCAN 2020, el cáncer de tiroides ocupa el noveno lugar de incidencia a nivel mundial [1]. Afecta en su mayoría a mujeres en un 75 %, y aunque puede presentarse a cualquier edad, la mediana al momento del diagnóstico es alrededor de los 50 años [2]. En los últimos 5 a 10 años, el manejo del cáncer de tiroides ha sufrido una transformación, con nuevas opciones de diagnóstico, incluyendo las pruebas moleculares, y de tratamiento. El Laboratorio Clínico Hematológico y la revista Medicina & Laboratorio realizaron el pasado mes de junio el Segundo Simposio de Medicina Diagnóstica. Conversemos de: Nódulo Tiroideo y Cáncer de Tiroides, con la participación de expositores nacionales e internacionales expertos en el tema. Los resúmenes han sido incluidos en el presente número de la revista. El doctor Alejandro Román-González en su conferencia "Actualización en el estudio del nódulo tiroideo", abarca paso a paso la conducta a seguir desde la detección de un nódulo tiroideo, su clasificación y posible tratamiento. Además, alerta a la sensibilización del clínico ante la angustia que padece un paciente que presenta un nódulo tiroideo. El doctor Alejandro Vélez-Hoyos con su presentación "Actualización del sistema de reporte Bethesda de citología de tiroides 2023", hace un recuento de dicho sistema desde su creación, y expone la clasificación más reciente del sistema Bethesda para tiroides, tanto en adultos como en niños. El doctor Roberto Ruiz-Cordero en su conferencia "La relevancia del análisis molecular en el diagnóstico y manejo de los nódulos tiroideos, y su utilidad como medida de control de calidad entre citopatólogos", menciona cómo el estudio genómico ha alcanzado grandes avances en el cáncer de tiroides, permitiendo la identificación de mutaciones de los genes RAS y la mutación BRAF p.V600E, entre otras. Adicionalmente, expone cómo el análisis molecular ha surgido como una herramienta crítica en el diagnóstico y manejo de los nódulos tiroideos, al mejorar significativamente la precisión diagnóstica y el número de intervenciones quirúrgicas innecesarias.

The Clinical Hematology Laboratory and the Medicina & Laboratorio Journal held the Second Diagnostic Medicine Symposium last June. Let's talk about: Thyroid Nodule and Thyroid Cancer, with the participation of national and international speakers who are experts on the subject. The abstracts have been included in this issue of the journal.

Experiencia de dos años con el uso de panel de RPC múltiple de meningitis-encefalitis en pacientes pediátricos en un hospital de tercer nivel en Argentina

Introducción: La meningitis bacteriana aguda (MBA) y la encefalitis son infecciones graves y el retraso en el tratamiento determina mayor morbimortalidad. En 2015 la FDA. aprobó un panel de RPC múltiple, BioFire® Filmarray® meningitis-encefalitis (FA-ME), que desde el 2019 se encuentra disponible en nuestro hospital. Objetivos: Estimar número de determinaciones positivas mediante FA-ME, evaluar concordancia con cultivo convencional (CC) y describir si FA-ME permitió realizar cambios en el tratamiento. Material y Métodos: Estudio retrospectivo, descriptivo, realizado durante 2019-2021 en el Hospital de Niños Pedro Elizalde. Se revisaron reportes de niños con meningitis, encefalitis y meningoencefalitis y líquido-cefalorraquídeo patológico a quienes se les realizó FA-ME. Resultados: Se incluyó a 32 niños, edad promedio: 48 meses. Fueron positivas 13 determinaciones de FA-ME: siete bacterias y seis virus. En dos MBA obtuvo desarrollo mediante CC. Con FA-ME se ajustó el tratamiento en dos MBA y se acortó el tratamiento intravenoso (IV). Discusión: Nuestro trabajo permitió conocer la etiología de cinco MBA con cultivo negativo, de las cuales dos habían recibido antimicrobianos, administrar quimioprofilaxis a contactos epidemiológicos, acortar el tratamiento IV y suministrar menos dosis de aciclovir; en concordancia con la literatura médica. Conclusiones: FA-ME permitió identificar la etiología en cinco MBA que no desarrollaron en CC, ajustar tratamientos empíricos inadecuados y acortar duración del tratamiento parenteral.

Background: Bacterial meningitis and encephalitis are life-threatening infections, a delay in its treatment is associated with high mortality. In 2015, FDA approved the Multiplex PCR FilmArray™ meningitis/encephalitis syndromic panel (FA-MEP), and it is available in our hospital since 2019. Aim: To estimate the number of positive FA-MEP, to evaluate the correlation to conventional culture (CC) results and to describe if the FA-MEP technology allowed changes in the treatment. Methods: Retrospective analysis of children with meningitis, encephalitis and meningoencephalitis and pathological cerebrospinal fluid analysis between 2019-2021, who were subject to FA-MEP testing at the Pedro Elizalde Children's Hospital. Results: 32 children, mean age: 48 months. 11 patients had positive FA-ME tests: 7 bacterial, 6 viral. 2 patients correlated with CC. Based on the FAMEP results, treatment was adjusted in 2 bacterial meningitis and the duration of intravenous treatment was shortened. Discussion: Our study allowed to establish the etiology of 5 culture negative bacterial meningitis, (2 had prior antibiotics), administer chemoprophylaxis to close contacts, and to administer fewer doses of acyclovir. Conclusions: The FA-MEP allowed us to identify 5 bacterial meningitis that tested negative by CC and early adjustment of inappropriate empirical antibiotics and to shorten the duration of parenteral treatments.

Elementos claves para evitar la contaminación en el Laboratorio de Biología Molecular de la provincia Holguín / Key elements to avoid contamination at the Molecular Biology Laboratory in Holguin province

Introducción: La técnica de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es una herramienta diagnóstica altamente específica, pero muy sensible. Su susceptibilidad a la contaminación constituye el principal problema en los laboratorios. Por ello, es urgente conocer las posibles causas de su origen, así como prevenirlas y contar con varios métodos para su eliminación. Objetivo: Describir los elementos claves para evitar la contaminación en el Laboratorio de Biología Molecular de la provincia Holguín. Métodos: Se realizó una revisión bibliográfica en la base de datos de Google académico y en artículos relevantes relacionados con el tema. Además, se tomó como referencia las Orientaciones sobre la bioseguridad en el laboratorio relacionada con la COVID-19 de la Organización Mundial de la Salud, versión 2021. Información, análisis y síntesis: Se recomienda llevar a cabo una valoración institucional del riesgo para identificar los peligros específicos de cada etapa del proceso: exposición a aerosoles, posibles salpicaduras, derrames de materiales y riesgos químicos relacionados con los reactivos. Cada etapa debe tener su riesgo evaluado. La prevención de la contaminación de una PCR comienza con la distribución de las zonas, por eso el flujo de trabajo en un laboratorio de biología molecular es solo en una dirección: de pre-PCR a PCR. Además de la aplicación de normas generales, se deben tomar otras medidas de eliminación de riesgos como el control de ingeniería, la eficacia germicida de la luz ultravioleta y el control de la contaminación del laboratorio. Conclusiones: Evitar la contaminación en el laboratorio de Biología Molecular de la provincia Holguín en el curso de la pandemia de SARS-CoV-2 es de vital importancia en la calidad de los servicios de salud.

Introduction: The polymerase chain reaction (PCR) technique is a highly specific but very sensitive diagnostic tool. Its susceptibility to contamination is the main problem in laboratories. Therefore, taking into account the possible causes of its origin, preventing it and having several methods for its elimination is of paramount importance. Objective: To describe the key elements to avoid contamination at the Molecular Biology Laboratory in Holguin province. Methods: A literature review was conducted in the Google Scholar database and in relevant articles related to the topic. In addition, the Laboratory biosafety guidance related to coronavirus disease (COVID-19) version 2021 was used as a reference. Information, analysis and synthesis: It is recommended to conduct an institutional risk assessment to identify the specific hazards of each stage of the process: exposure to aerosols, possible splashes, material spills and chemical hazards related to reagents. Preventing contamination of a PCR starts with the layout of the areas, that is why the workflow in a molecular biology laboratory is only in one direction: from pre-PCR to PCR. In addition to the application of general standards, other hazard elimination measures such as engineering control, germicidal efficacy of ultraviolet light, and laboratory contamination control must be taken. Conclusions: Avoiding contamination in the Molecular Biology Laboratory in Holguin province in the course of the SARS-CoV-2 pandemic is vital for the quality of health services.

Software de Biología Molecular como herramienta educativa en el primer año de la carrera demedicina

Introducción: La asignatura Biología Molecular constituye un gran desafío para los estudiantes del primer año de Medicina, pues se imparte en la etapa de adaptación a la Educación Superior. El objetivo de esta investigación consistió en confeccionar un software educativo offline de la asignatura Biología Molecular como instrumento de trabajo que permitiera aplicar una nueva estrategia metodológica del proceso de enseñanza-aprendizaje de los profesores y estudiantes del primer año de la carrera de Medicina. Método: Se programó en HTML y se distribuyó a todos los estudiantes y profesores de la asignatura Biología Molecular del curso 2021. Se aplicó una nueva estrategia metodológica altamente participativa de los estudiantes. Se analizaron los resultados académicos de 279 estudiantes que examinaron en las tres convocatorias de exámenes finales de la asignatura, midiendo y graduando el rendimiento académico obtenido con el empleo del software educativo. Resultados: El software educativo diseñado con apariencia de un sitio Web presenta un menú principal con opciones de presentación, instrucciones, plan calendario, conferencias, guías de estudio para las clases talleres, autoevaluaciones y una biblioteca. Funciona en cualquier dispositivo que posea un navegador de internet. Se alcanzó un elevado rendimiento académico acompañado de una alta calidad del mismo. Conclusiones: El software educativo fue empleado exitosamente por estudiantes y profesores; constituyó la herramienta fundamental para el cambio metodológico aplicado en la impartición de la asignatura y se obtuvo un elevado rendimiento académico por parte de los estudiantes.

Introduction: The subject Molecular Biology constitutes a great challenge for the students of the first year of Medicine, since it is taught in the stage of adaptation to Higher Education. The objective of this research was to develop an educational software for the subject of Molecular Biology as a working tool that would allow the application of a new methodological strategy for the teaching-learning process of teachers and students of the first year of Medicine. Method: The educational software was programmed in HTML and distributed to all students and teachers of the subject Molecular Biology of the 2021 course. A new methodological highly participative strategy of students was applied. The academic results of 279 students who took the three final exams of the course were analyzed, measuring and grading the academic performance obtained with the use of the educational software. Results: The educational software designed to look like a website presents a main menu with presentation options, instructions, calendar plan, lectures, study guides for classes, workshops, self-evaluations and a library. It works on any device with a web browser. High academic performance accompanied by high academic quality was achieved. Conclusions: The educational software was successfully employed by students and teachers, which was fundamental for the methodological change applied in the teaching of the subject with a high academic performance.

Identificación de agentes virales en niños con infección respiratoria aguda

Introducción: Las infecciones respiratorias agudas representan un problema de salud en niños, con elevadas cifras de morbilidad y elevado índice de mortalidad. Objetivo: Determinar la circulación de virus respiratorios en niños ingresados con diagnóstico de infección respiratoria aguda, negativos para COVID-19. Métodos: Estudio observacional descriptivo en 119 niños con infección respiratoria aguda, entre 0 y 6 años e ingreso hospitalario entre octubre de 2021-abril de 2022. Se tomaron muestras de exudado nasofaríngeo para estudio virológico (reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real). Las variables estudiadas fueron: edad, sexo, diagnóstico clínico, período de ocurrencia y aislamiento de virus respiratorios. Resultados: Predominó el sexo femenino con 51 % y la edad correspondiente al período neonatal con 50 %, seguidos por lactantes entre 1 y 11 meses (40 %), solo 10 % entre 1 y 6 años de edad. Resultaron positivas 42 % de las muestras con predominio del CoV229E (78 %); se aislaron otros virus como influenza A (6 %), sincitial respiratorio (6 %), CoVOC43 (2 %) y rinovirus (2 %). El CoV229E fue frecuente en pacientes con infección respiratoria aguda alta (48,7 %), seguido de infección respiratoria aguda grave (20,5 %) y bronquiolitis (28,2 %). Se detectó coinfección viral solo en infección respiratoria aguda grave, específicamente por IFA/CoV229E (4 %) y CoV229E/bocavirus (2 %). Conclusiones: Se destaca la importancia de la biología molecular para el aislamiento viral. El coronavirus CoV229E tiene relevancia en los casos de infección respiratoria aguda alta y grave principalmente en los menores de 1 año.

Introduction: Acute respiratory infections represent a health problem in children, with high morbidity and high mortality rates. Objective: To determine the circulation of respiratory viruses in children admitted with a diagnosis of acute respiratory infection, negative to COVID-19. Methods: Descriptive observational study in 119 children with acute respiratory infection, in the ages from 0 to 6, and with hospital admission in the period from October 2021 to April 2022. Nasopharyngeal exudate samples were taken for virological study (real-time polymerase chain reaction). The variables studied were: age, sex, clinical diagnosis, period of occurrence and isolation of respiratory viruses. Results: The female sex predominated with 51% and the age corresponding to the neonatal period with 50 %, followed by infants between 1 and 11 months (40%), and only 10% in the ages from 1 to 6 years. 42 % of the samples with a predominance of CoV229E (78%) were positive; other viruses such as influenza A (6 %), respiratory syncytial (6 %), CoVOC43 (2%) and rhinovirus (2%) were isolated. CoV229E was common in patients with high acute respiratory infection (48.7%), followed by severe acute respiratory infection (20.5%) and bronchiolitis (28.2%). Viral co-infection was detected only in severe acute respiratory infection, specifically by IFA/CoV229E (4%) and CoV229E/bocavirus (2%). Conclusions: The importance of molecular biology for viral isolation is highlighted. The Coronavirus CoV229E has relevance in cases of acute high and severe respiratory infection mainly in children under 1 year old.

Métodos de diagnóstico molecular en la práctica odontológica / Molecular diagnostic methods in dental practice

El diagnóstico molecular, mediante la aplicación de técnicas molecu- lares, ha permitido estudiar microorganismos presentes en el inicio y progresión de la caries dental, enfermedad periodontal, y en los fracasos endodónticos. Las técnicas moleculares permiten la detección y cuan- tificación del material genético del ácido desoxirribonucleico (DNA), ácido ribonucleico (RNA) o proteínas, lo que posibilita el estudio del genoma completo o secuencias de DNA específicas. Estas técnicas surgen como una necesidad de detectar microorganismos de difícil o lento crecimiento en cultivos; la técnica más utilizada es la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) que permite la amplificación de peque- ños segmentos de material genético al utilizar cebadores, por lo que es un método económico, preciso, sensible y rápido para la detección de microorganismos. El presente artículo de revisión bibliográfica servirá para informar sobre los avances de las técnicas moleculares utilizadas para el diagnóstico en la práctica odontológica (AU)

Molecular diagnosis, through the application of molecular techniques, has made it possible to study microorganisms present in the onset and progression of dental caries, periodontal disease, and endodontic failures. Molecular techniques allow the detection and quantification of the genetic material of deoxyribonucleic acid (DNA), ribonucleic acid (RNA) or proteins, allowing the study of the complete genome or specific DNA sequences, they arise as a need to detect difficult or slow growing microorganisms in cultures. The most widely used technique is the polymerase chain reaction (PCR) that allows the amplification of small segments of genetic material using primers, it is an economical, precise, sensitive and fast method for the detection of microorganisms. This bibliographic review article will serve to report on the advances in molecular techniques used for diagnosis in dental practice (AU)

Aportes de la biotecnología en el diagnóstico de COVID-19 / Biotechnology contributions in COVID-19 diagnosis

Introducción: en diciembre del año 2019 surgió en China una neumonía viral; el virus fue identificado como un coronavirus SARS-CoV-2, que se propagó rápidamente de tal manera que se convirtió en pandemia. La alta contagiosidad y la presencia de portadores asintomáticos dificultaron el diagnóstico de la infección y la toma de decisiones sanitarias. Objetivo: el objetivo de esta revisión bibliográfica es presentar y describir las principales técnicas utilizadas actualmente para el diagnóstico de COVID-19 y establecer su relación con los conocimientos de distintas disciplinas y tecnologías emergentes que confluyen en la Biotecnología bioquímico-farmacéutica orientada a la Salud humana. Metodología: se realizó una revisión de la bibliografía disponible en PubMed a partir de enero de 2020 sobre las pruebas diagnósticas que se encuentran actualmente en uso, en el ámbito sanitario, para la detección y seguimiento de la enfermedad COVID-19. También se realizaron búsquedas a través de Google y Google Académico para publicaciones de organismos de Salud en referencia a métodos diagnósticos. Resultados: se presenta una importante cantidad de pruebas diagnósticas, basadas en diferentes tecnologías, que desempeñan un papel clave en la pandemia de COVID-19. Algunas de ellas muy sofisticadas, como la secuenciación genómica de próxima generación, otras más estándar, pero igualmente robustas, como la reacción en cadena de la polimerasa (PCR). También otras adaptadas para el brote pandémico, como la amplificación isotérmica de ácidos nucleicos mediada por bucle. Todas las mencionadas se consideran de tipo molecular, pero también existen las pruebas serológicas, como ELISA, que incluyen ensayos en plasma o de tipo inmunológico. Estas sirven para detectar anticuerpos frente a la exposición al virus o antígenos en personas potencialmente infectadas. Conclusiones: los procesos de investigación y desarrollo biotecnológicos aplicados al diagnóstico y los conocimientos científicos previos permitieron una respuesta tanto nacional como internacional rápida y eficaz en medio de una inédita pandemia global. En esta revisión destacamos las principales técnicas, en qué estadio se deben usar y qué información nos aportan. (AU)

Introduction: in December 2019, a viral pneumonia emerged in China, identifying the virus as a SARS-CoV-2 coronavirus, which spread rapidly in such a way that it became a pandemic. The high contagiousness and the presence of asymptomatic carriers make difficulted to diagnose the infection and to make health decisions. Target: the objective of this review is to present and describe the main techniques currently used for the diagnosis of COVID-19, and to establish their relationship with the knowledge of different disciplines and emerging technologies that converge in biochemical-pharmaceutical biotechnology oriented to human health. Methodology: a review of the literature available in Pubmed from January 2020 on the diagnostic tests that are currently in use in the health field, for the detection and monitoring of COVID-19 disease, was carried out. Searches were also carried out through Google and Google Scholar for publications of Health organizations in reference to diagnostic methods. Results: a significant number of diagnostic tests are presented, based on different technologies, which play a key role in the COVID-19 pandemic. Some of them are very sophisticated, such as next-generation genomic sequencing, others more standard, but equally robust, such as polymerase chain reaction. Also others adapted for the pandemic outbreak such as loop-mediated isothermal amplification of nucleic acids. All of the aforementioned are considered molecular, but there are also serological tests, such as ELISA, which include plasma or immunological tests. These serve to detect antibodies against exposure to the virus or antigens in potentially infected people. Conclusions: biotechnological research and development processes applied to diagnosis and previous scientific knowledge allowed a rapid and effective national and international response in the midst of an unprecedented global pandemic. In this review we highlight the main techniques, at what stage they should be used and what information they provide us. (AU)

Leucemia promielocítica: enfoques oncogenéticos y moleculares en la era de la medicina de precisión / Promyelocytic leukemia: oncogenetic and molecular approaches in the precision´s medicine era

Introducción: El estudio de la patogenia molecular de la leucemia promielocítica revolucionó las bases de la medicina personalizada al identificar la oncoproteína PML/RARα como diana de terapias dirigidas al mecanismo oncogenético fundador de la enfermedad. Sin embargo, en las últimas décadas, se realizaron otros descubrimientos que aportan mayor información acerca de su biogénesis y desarrollo y el impacto potencial de los mismos en la implementación de técnicas de diagnóstico y herramientas pronósticas como expresión del rápido perfeccionamiento de la medicina traslacional. Objetivo: Exponer los principales descubrimientos en los mecanismos oncogenéticos y moleculares de actualidad en la leucemia promielocítica. Métodos: Se realizó una búsqueda exhaustiva en bases de datos como Scielo, Pubmed, ScienceDirect, Redalyc, Google académico. Se utilizaron como referencias los artículos actualizados publicados en los últimos 5 años en idioma inglés y español. Se efectuó un análisis y resumen de la bibliografía y se tomaron los aspectos más importantes referidos al tema. Análisis y síntesis de la información: Se abordaron los principales aportes de la biología molecular al conocimiento del origen de ésta enfermedad, más allá del enfoque clásico basado en el gen PML/RARα, así como sus variantes y otros aspectos de interés en su monitorización. Conclusiones: Las características genéticas de esta enfermedad evidencian un paisaje mutacional diferente al de otras neoplasias mieloides malignas y señalan con especial énfasis la importancia de la integración clínico-biológica para facilitar, perfeccionar y desarrollar el proceso de atención integral a los pacientes con hemopatías malignas(AU)

Introduction: The study of the molecular pathogenesis of promyelocytic leukemia revolutionized the foundations of personalized medicine by identifying the PML/RARαoncoprotein as a target for therapies directed at the founding oncogenetic mechanism of the disease. However, in recent decades, other discoveries that provide more information about their biogenesis and development, and their potential impact on the implementation of diagnostic techniques and prognostic tools as an expression of the rapid improvement of translational medicine. Objective: To expose the main discoveries in the current oncogenetic and molecular mechanisms in promyelocytic leukemia. Methods: An exhaustive search was carried out in databases such as Scielo, Pubmed, ScienceDirect, Redalyc, Google Scholar, and updated articles published in the last 5 years in English and Spanish were used as references. An analysis and summary of the bibliography was carried out and the most important aspects related to the subject were taken. Analysis and synthesis of information: the main contributions of molecular biology to the knowledge of the origin of this entity were addressed, beyond the classical approach based on the PML/RARα gene, as well as its variants and other aspects of interest in the monitoring of the illness. Conclusions: The genetic characteristics of this disease show a mutational landscape different from that of other malignant myeloid neoplasms and point out with special emphasis the importance of clinical-biological integration to facilitate, improve and develop the comprehensive care process for patients with malignant blood diseases(AU)

Diagnóstico molecular del SARS-CoV-2 en los Laboratorios LIORAD-AICA+: experiencia de un año de trabajo / Molecular diagnosis of SARS-CoV-2 at LIORAD-AICA+ laboratories, a one-year work experience

Introducción: El aumento de los casos de COVID-19 en Cuba requirió el desarrollo de nuevas capacidades para el diagnóstico molecular de la infección. En la Unidad Empresarial de Base Laboratorios LIORAD-AICA+, de La Habana, se estableció un Laboratorio de Biología Molecular para el diagnóstico molecular de la enfermedad. Objetivo: Analizar la experiencia de un año de trabajo, en el diagnóstico molecular de la COVID-19, del Laboratorio de Biología Molecular de la UEB LIORAD. Métodos: Para iniciar el diagnóstico molecular del SARS-CoV-2 en la UEB Laboratorios LIORAD se llevó a cabo un conjunto de acciones que estuvieron dirigidas a la evaluación de los riesgos, establecimiento de las áreas y el flujo de trabajo, y formación de equipos de trabajo. El personal se capacitó, se modificaron y elaboraron procedimientos e instructivas. Resultados: La evaluación de los riesgos permitió detectar un conjunto de riesgos asociados a la actividad de diagnóstico y se establecieron las medidas para mitigarlos. El personal del laboratorio recibió un total de 23 capacitaciones, se elaboró un total de ocho procedimientos e instructivas y dos registros. El laboratorio procesó en un año un total de 125 154 muestras. Conclusiones: Durante el año de trabajo el Laboratorio de Biología Molecular de la UEB LIORAD se realizó el diagnóstico certero de la enfermedad. Esto evidencia la importancia de la capacitación del personal y el cumplimiento de las buenas prácticas y medidas de bioseguridad en el trabajo con muestras potencialmente infecciosas(AU)

Introduction: The increase in the number of cases of COVID-19 in Cuba demanded of new capacities for the molecular diagnosis of the infection. A Laboratory of Molecular Biology for the molecular diagnosis of this disease was installed at the Base Business Unit LIORAD-AICA+ Laboratories in Havana. Objective: To analyze a one-year work experience in the molecular diagnosis of COVID-19 at the Laboratory of Molecular Biology, LIORAD-AICA+. Methods: To begin with the molecular diagnosis of SARS-CoV-2 at LIORAD-AICA+, a group of actions were carried out aimed at evaluating the risks, establishing the working areas and flow, and training the work team. Personnel were trained, and procedures and guidelines were drawn up and modified. Results: Risk assessment allowed identifying several risks associated with the diagnostic activity, and measures were established to mitigate them. The laboratory personnel received 23 training sessions; and eight procedures and guidelines, and two registers were drawn up. The laboratory processed a total of 125 154 samples in a year. Conclusions: During the work year, the accurate diagnosis of the disease was conducted at the Laboratory of Molecular Biology, LIORAD-AICA+. This evidences the importance of personnel training and the compliance with good practices and biosafety measures when working with potentially infectious samples(AU)

Una mirada al cáncer desde la perspectiva molecular / A Look at Cancer from a Molecular Perspective

RESUMEN El cáncer es una enfermedad multifactorial que provoca alteraciones en la diferenciación celular y un descontrol en la proliferación normal de las células, lo que conlleva a una pérdida de las características estructurales y funcionales de las células en un tejido. Esta enfermedad constituye un importante problema de salud por sus consecuencias desde el punto de vista individual, social y económico. Se conoce que las alteraciones moleculares, tienen un importante rol en las bases fisiopatológicas del cáncer. Esto ha intensificado en los últimos años las investigaciones básicas biomédicas en ese campo como vía para conseguir una mejor prevención, diagnóstico y tratamiento de estas patologías. En la presente revisión se expone una actualización sobre algunos aspectos relacionados con las bases moleculares del cáncer, la cual puede brindar herramientas teóricas útiles para la acción en diferentes escenarios de las ciencias biológicas, médicas y de la salud que mejoren la esperanza de vida del paciente con un padecimiento oncológico.

ABSTRACT Cancer is a multifactorial disease that causes alterations in cell differentiation and a lack of control in the normal proliferation of cells, which leads to a loss of the structural and functional characteristics of cells in a tissue. This disease constitutes an important health problem due to its consequences from the individual, social and economic point of view. Molecular alterations are known to play an important role in the pathophysiological basis of cancer. This has intensified basic biomedical research in this field in recent years as a way to achieve better prevention, diagnosis and treatment of these pathologies. This review presents an update on some aspects related to the molecular bases of cancer, which can provide useful theoretical tools for action in different scenarios of biological, medical and health sciences that improve the patient's life expectancy with an oncological condition.

DETECCIÓN POR PCR DE Haemoproteus archilochus EN Amazilia tzacatl (Trochilidae) EN COLOMBIA / PCR detection of Haemoproteus archilochus in Rufous-tailed Hummingbird Amazilia tzacatl (Trochilidae) in Colombia

RESUMEN La infección causada por haemosporidios en colibríes no ha sido estudiada en zonas agroforestales o urbanas de la vertiente occidental de la Cordillera Oriental de los Andes en el departamento de Santander, pese a existir evidencia de esta en otros grupos de aves. Con el fin de detectar e identificar los parásitos causales de infecciones por haemosporidios, se tomaron muestras de sangre de la vena yugular de colibríes en seis localidades. La presencia de infección se llevó a cabo por PCR y la identificación de los parásitos se hizo a partir de secuencias del gen mitocondrial Citocromo b (Cyt b). Se obtuvieron 86 muestras de sangre de 20 especies de colibríes. La prevalencia de infección en general fue del 43 % y en el 18 % de las muestras infectadas del colibrí Amazilia colirufa (Amazilia tzacatl) se identificaron secuencias de Haemoproteus archilochus correspondientes al linaje HUMHA4. Se reporta por primera vez para Colombia la presencia de H. archilochus en A. tzacatl, por medio de técnicas de biología molecular. Este parásito podría estar implicado en la haemoproteosis de colibríes en el país.

ABSTRACT Haemosporidian infection in hummingbirds has not been studied in agroforestry or urban areas of the Eastern Andes' western slope, in the department of Santander, despite the existence of evidence of this in other groups of birds. To detect and identify the causative parasites of haemosporidium infections, we took blood samples from the jugular vein of hummingbirds in six locations. PCR carried out the diagnosis of the infection, and the identification of the parasites was made from sequences of the mitochondrial gene Cytochrome b (Cyt b). 86 blood samples were obtained from 20 species of hummingbirds. The prevalence of infection, in general, was 43 %, and in 18 % of the infected samples of Rufous-tailed Hummingbird (Amazilia tzacatl), sequences of HUMHA4 lineage from Haemoproteus archilochus were identified. The presence of H. archilochus in A. tzacatl is reported for the first time in Colombia using molecular biology techniques. This parasite could be implicated in the haemoproteosis of hummingbirds in the country.

A mutação do gene SLC11A2 está associada à anemia por deficiência de ferro refratária após cirurgia bariátrica? / Does slc11a2 gene mutation associate with iron-refractory iron-deficiency anemia after bariatric surgery?

ABSTRACT - BACKGROUND: After bariatric surgery, if there is iron-refractory iron-deficiency anemia (IRIDA) and does not respond to supplemental iron therapy, excluding other possible etiologies, genetic changes involved in iron metabolism should be considered. AIM: This study aimed to investigate the association of both mutations 1285G-C and 1246C-T, in the SLC11A2 gene, and the etiopathogenesis of anemia refractory to iron supplementation in patients undergoing bariatric surgery using Roux-en-Y gastric bypass (RYGB). METHODS: A case-control study was conducted, in which 100 patients were evaluated as Cases Group [subdivided into (i) with Anemia and (ii) without Anemia] and 100 individuals as Controls, comprising both sexes. Inherited and acquired causes of IRIDA were excluded. DNA was extracted from leukocytes of peripheral blood, and the regions that cover both mutations have been amplified by the molecular techniques such as polymerase chain reaction/restriction fragment length polymorphism. RESULTS: The 1285G-C mutation was not determined in any of the 400 alleles analyzed. Regarding the 1246C-T mutation, the wild CC genotype was found with a higher prevalence in the Control Group (34%) (OR 0.5475; 95%CI 0.2920-1.027; p=0.0827). The mutant TT genotype was found only in the Cases Group I (with Anemia) (13%). CONCLUSION: The results show the association between 1246C-T mutation, in the SLC11A2 gene, and the etiopathogenesis of IRIDA to iron supplementation in the evaluated sample. There are differences, at the molecular level, in patients with and without IRIDA after bariatric surgery using RYGB.

RESUMO - RACIONAL: Após cirurgia bariátrica, se houver anemia por deficiência de ferro e não responder à terapia de ferro suplementar, excluindo-se outras possíveis etiologias, alterações genéticas envolvidas no metabolismo férrico devem ser consideradas. OBJETIVO: Investigar a associação das mutações 1285G-C e 1246C-T, no gene SLC11A2, e a etiopatogênese da anemia refratária à suplementação de ferro em pacientes submetidos à cirurgia bariátrica pela técnica de derivação gástrica em Y-de-Roux. MÉTODOS: Estudo de caso-controle, no qual forma avaliados 100 pacientes em Grupos de Casos (subdividido em Grupo I - com Anemia e Grupo II - sem Anemia) e 100 indivíduos como Controles, de ambos os sexos. Causas hereditárias e adquiridas de anemia ferropriva refratária ao ferro, foram excluídas. O DNA foi extraído de leucócitos de sangue periférico e as regiões que abrangem ambas as mutações foram amplificadas pelas técnicas moleculares de Reação em Cadeia da Polimerase/Polimorfismo do Comprimento do Fragmento de Restrição. RESULTADOS: A mutação 1285G-C não foi determinada em quaisquer dos 400 alelos analisados. Em relação à mutação 1246C-T, o genótipo homozigoto selvagem CC foi encontrado com maior prevalência nos Controles (34%) (OR: 0,5475; 95%IC: 0,2920-1,027; p=0,0827). O genótipo homozigoto mutante TT foi encontrado apenas no Grupo I - com Anemia (13%). CONCLUSÃO: Os resultados demonstram a associação da mutação 1246C-T, no gene SLC11A2, e a etiopatogênese da anemia ferropriva refratária e persistente à suplementação de ferro, nesta amostra de pacientes. Há diferenças, em nível molecular, em pacientes com e sem anemia ferropriva refratária ao ferro após cirurgia bariátrica por derivação gástrica em Y-de-Roux.

Papel do Receptor Lgr5 no Prognóstico e na Biologia de Sarcomas de Partes Moles / Role of the Lgr5 Receptor in the Prognosis and Biology of Soft Tissue Sarcomas

INTRODUÇÃO: Os sarcomas de partes moles (SPM) de alto grau são neoplasias heterogêneas, de prognóstico ruim e que apresentam poucas alternativas de tratamento. A identificação de marcadores de resposta tumoral ao tratamento, prognóstico, e até ao desenvolvimento de novas drogas, é uma busca incessante para um melhor tratamento dos sarcomas. Neste aspecto, o receptor Lgr5 tem um grande potencial em ser um novo alvo molecular, sendo um marcador de células-tronco das criptas intestinais e glândulas mamárias que também atua como um modulador negativo da sinalização da via Wnt/ß-catenina, uma das mais importantes na biologia de sarcomas emerge como um promissor candidato para estudos pré-clínicos, uma vez que já foi demonstrada sua importância em tumores do trato gastrointestinal. Para isso, os modelos de tumor de xenoenxerto derivado do paciente (PDX) representam uma plataforma valiosa para identificar novos biomarcadores e novos alvos, assim como o Lgr5 para avaliar a resposta à terapia e os mecanismos de resistência. OBJETIVO: Este estudo teve como objetivo estabelecer, caracterizar e testar a proteína Lgr5 através de ensaios in vitro e in vivo para desvendar a importância de Lgr5 na biologia de SPM e estabelecer uma estrutura integrada, convergente e translacional para o estudo deste tipo de tumor. MATERIAIS E MÉTODOS: Para a determinação da expressão de Lgr5 foi estabelecida duas coortes de estudo, uma retrospectiva oriunda do Registro Institucional de Sarcomas e uma prospectiva, onde foram convidados pacientes operados na Instituição com o intuito de gerar Patient-derived xenografts (PDX), um modelo-pré-clínico que possui a capacidade de manter as características moleculares dos tumores dos pacientes. Para isso, foram utilizados fragmentos implantados em camundongos imunossuprimidos para gerar esses modelos tumorais derivados de pacientes, além dos estudos funcionais in vitro utilizando linhagens de SPM para análise de perfil de expressão da proteína Lgr5 através de ensaios com imunofluorescência para verificar a capacidade de expressão de Lgr5, citometria de fluxo para verificar o padrão e quantidade de proteína nas amostras analisadas e western blotting para obter um padrão de marcação da proteína Lgr5. Além dos ensaios funcionais para avaliar a participação da proteína na proliferação, se a expressão da proteína interfere no poder migratório das células e tumores de SPM e capacidade de auto renovação, bem como sua associação com os dados clínicos e dados de sobrevida. RESULTADOS: O Registro Institucional retrospectivo conta com mais de 300 pacientes, já o Registro prospectivo com 70 pacientes que derivaram a geração de 33 PDX. Foi observado que pacientes com H-score superior a 20 apresentaram sobrevida global menor em 5 anos em comparação com o H-score de pacientes com valores inferiores a 20. Agora na outra análise feita, o H-score de pacientes com valores superiores a 25 é pior em comparação com os que apresentaram valores inferiores a 25 nos dados de sobrevida livre de doença. Além disso, células que superexpressam a proteína Lgr5 tem maior capacidade migratória (p= 0.02) e uma tendência de aumento na proliferação e auto renovação. Realizamos o teste de implante dessas populações positivas e negativas de Lgr5, separadas previamente por cell sorting. Para isso foram utilizados animais Balb/c Nude. Sugerindo que a expressão da proteína transduzida pode ser modulada por mecanismos compensatórios que precisam ser explorados. CONCLUSÃO: A construção do Registro Institucional de SPM é um grande passo para o melhor compreendimento da biologia dos Sarcomas, além da possibilidade de estudar novos alvos terapêuticos desse tumor raro, uma vez que os estudos e artigos científicos ainda são muito escassos. A geração dos modelos PDX também foi uma estratégia implantada muito bem executada com a geração de 33 PDX de diversos subtipos histológicos. Além da proteína Lgr5 induzir a migração celular a sua expressão está relacionada a um pior prognóstico, uma vez que, quanto maior a expressão de Lgr5 menor é a sobrevida global do paciente.

INTRODUCTION: High-grade soft tissue sarcomas (STS) are heterogeneous neoplasms with a poor prognosis and few treatment alternatives. The identification of tumor response markers to treatment, prognosis, and even the development of new drugs, is an incessant search for a better treatment of sarcomas. In this aspect, the Lgr5 receptor has great potential to be a new molecular target, being a marker of stem cells of the intestinal crypts and mammary glands that also acts as a negative modulator of the signaling of the Wnt/ß-catenin pathway, one of the most important in the biology of sarcomas emerges as a promising candidate for preclinical studies, since its importance in tumors of the gastrointestinal tract has already been demonstrated. To that end, patient-derived xenograft (PDX) tumor models represent a valuable platform to identify new biomarkers and new targets, as does Lgr5 to assess therapy response and resistance mechanisms. OBJECTIVE: This study aimed to establish, characterize, and test the Lgr5 protein through in vitro and in vivo assays to unravel the importance of Lgr5 in the biology of PMS and to establish an integrated, convergent and translational framework for the study of this type of tumor. MATERIALS AND METHODS: To determine the expression of Lgr5, two study cohorts were established, a retrospective one from the Institutional Registry of Sarcomas and a prospective one, in which patients operated on at the Institution were invited to generate Patient-derived xenografts (PDX), a pre-model -clinical that has the ability to maintain the molecular characteristics of patients' tumors. For this, fragments implanted in immunosuppressed mice were used to generate these tumor models derived from patients, in addition to in vitro functional studies using SPM strains to analyze the expression profile of the Lgr5 protein through immunofluorescence assays to verify the ability to express Lgr5, flow cytometry to verify the pattern and amount of protein in the analyzed samples and western blotting to obtain a pattern of labeling of the Lgr5 protein. In addition to functional assays to assess the protein's participation in proliferation, whether protein expression interferes with the migratory power of SPM cells and tumors and self-renewal capacity, as well as its association with clinical data and survival data. RESULTS: The Institutional Retrospective Registry has more than 300 patients, while the Prospective Registry has 70 patients who derived the generation of 33 PDX. It was observed that patients with an H-score greater than 20 had a lower overall survival at 5 years compared to the H-score of patients with values below 20. Now in the other analysis performed, the H-score of patients with values greater than 25 it is worse compared to those who had values less than 25 in the disease-free survival data. Furthermore, cells that overexpress the Lgr5 protein have greater migratory capacity (p=0.02) and a tendency to increase proliferation and self-renewal. We performed the implant test of these positive and negative populations of Lgr5, previously separated by cell sorting. For this, Balb/c Nude animals were used. Suggesting that the expression of the transduced protein can be modulated by compensatory mechanisms that need to be explored. CONCLUSION: The construction of the Institutional Registry of PMS is a big step towards a better understanding of the biology of Sarcomas, in addition to the possibility of studying new therapeutic targets for this rare tumor, since studies and scientific articles are still very scarce. The generation of PDX models was also an implemented strategy very well executed with the generation of 33 PDX of several histological subtypes. In addition to the Lgr5 protein inducing cell migration, its expression is related to a worse prognosis, since the higher the Lgr5 expression, the lower the overall survival of the patient